ag尊龙凯时大鼠肝星形细胞THSC的培养指南主要包括细胞培养条件、细胞处理、培养步骤及售后条款。以下是详细说明：

一、细胞培养条件

- **细胞名称**：大鼠肝星形细胞THSC
- **生长特性**：细胞在无血清条件下可良好复苏
- **冻存条件**：推荐使用无血清冻存液
- **培养体系**：采用DMEM培养基
- **传代方法**：首次建议以1:2的比例进行传代。
- **传代情况**：每2天更换培养基。
- **备注**：请使用无菌离心管收集和过渡培养基，若对比效果不佳，建议直接选用ag尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，待细胞状态良好时，用完全培养液填满细胞瓶并密封，这是一种最佳的运输处理方式。随后，使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，置于超净台下操作，再将其放入设定在37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。检查细胞生长情况，并对不同倍数进行拍照（建议拍摄40x、100x、200x的图像各一张），前三天的照片为售后依据。若未提供照片，视为状态正常。（建议在传代后，一瓶使用原瓶完全培养基，另一瓶使用自配培养基以便进行对比，且换液时瓶盖需松动。）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

1. 若细胞汇合度未超过80%，将完全培养液收集至离心管，保留5ml培养基，在37℃、5%CO2孵箱中培养。
2. 如果细胞密度超过80%，可按以下步骤进行传代：
- 丢弃培养上清，用不含钙镁PBS清洗细胞1-2次。
- 加入约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃孵箱消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞开始变圆且脱落，迅速拿回进行操作，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
- 轻轻吹打细胞，吸出液体，将沉淀转移至15ml离心管，设置1000RPM离心5分钟，去除上清后补加1-2ml完全培养基重悬。
- 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5%CO2培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；
2. 添加约1ml 0.25%胰蛋白酶，待细胞变圆后加入5ml完全培养液，结束消化，轻轻吹打，使细胞脱落，然后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 去除上清，沉淀细胞后加入1mlag尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
4. 冻存细胞需直接放入-80℃冰箱，若后续需转移至液氮罐，需在-80℃存放24小时以上后方可进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴解冻，直至细胞冻存管无结晶，随后用75%酒精擦拭外壁；
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，将细胞以5ml完全培养基重悬并接种至T25培养瓶，在37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养；
4. 第二天更换新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

局部细胞如果附着不够牢固，在运输过程中可能导致脱落，这是正常现象。如细胞脱落严重，建议收集培养液至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清做过渡培养，脱落的细胞加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬消化1-2分钟后，用5ml完全培养基终止反应，离心后去掉上清，再加1-2ml完全培养基重悬，然后以1:2比例分瓶传代（两个T25），并补充新的完全培养基至5-8ml，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。

五、售后条款

1. 不符合重发条件的情况：
- 运输途中遭遇问题（如细胞丢失、瓶身破损、漏液等），将免费重发。
- 如细胞污染，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后重发。
- 若常温发货的细胞静置24小时或干冰发货细胞解冻后24小时内存活率低于标准，需提供真实的细胞状态照片，核实后可以重发。
- 对于细胞活性问题，请在7天内提供实验结果（可用台盼蓝染色法确认细胞活性），核实后进行重发。
- 如果在收到当天或第2、3天未告知不合格情况，视为产品合格。如在4-7天内出现问题，则需提供前三天的照片及详细操作步骤，通过技术人员判断责任，重新发货。
2. 不予重发的情况：
- 客户造成的细胞污染；
- 不正确操作导致的细胞状态不良；
- 非推荐培养体系导致的问题；
- 未提供前三天照片的细胞状态不良；
- 或者细胞在收货后2天内未告知的问题。
- 具体情况需根据实际情况判断。