背景介绍

裸露的RNA分子具备负电荷和亲水性，因此在细胞膜的静电排斥作用下，难以顺利进入细胞。此外，这些RNA分子也易被普遍存在的RNA酶快速降解。因此，为了使RNA顺利进入细胞，必须使用保护性外壳。细胞膜主要由脂质组成，利用脂质囊泡包封RNA可以帮助其穿过细胞膜并释放到细胞质中。为了达成这一目的，囊泡应选用带正电的脂质以结合负电的RNA。然而，由于由永久性阳离子脂质组成的囊泡会因静电作用与带负电的细胞膜发生反应，可能导致细胞毒性。因此，脂质结构应对内体酸性环境做出响应，以实现正电荷的分子交互。

脂质纳米粒结构

脂质纳米粒（LNP）通常包含四种关键成分：可离子化的阳离子脂质、磷脂（两性离子脂质）、胆固醇以及PEG化脂质。这些成分在LNP中扮演着至关重要的角色，有助于其有效传递mRNA，同时确保其在细胞内的保护和传播。

脂质纳米粒递送机制

作为mRNA传递系统，脂质纳米粒（LNP）通过多个步骤来确保mRNA能够安全、有效地被递送至目标细胞并被转译成蛋白质。在LNP中，可电离的阳离子脂质起着重要的作用，它在组装LNP时能够结合负电的RNA，且在中性pH下保持不带电，以降低细胞的毒性。而在细胞吸收后，伴随内体pH的降低，这些阳离子脂质会再次带上正电，以促进内体逃逸。经过研究，胆固醇及PEG脂质的变体被证明能够调节LNP的物理特性、纳米结构和最终的生物效应。此外，两性离子磷脂被称为“辅助脂质”，在保护mRNA、促进细胞内转运及激活免疫反应方面发挥着关键作用。

LNP转染实验步骤

以下是基于6孔板的转染步骤参考条件。对于其他细胞培养形式，请参考表1。

1. mRNA预混液制备：将25 μg mRNA（浓度为1 μg/μL）与60 μL Buffer混合。

2. mRNA-easyLNP复合物制备：将625 μL mRNA预混液与625 μL easyLNP纳米混悬液混合，涡旋2-3秒以确保混合均匀。

3. 加入细胞：将125 μL mRNA-easyLNP复合物加入细胞，轻轻晃动以使其均匀分布。

4. 分析时间：在培养24-48小时后进行分析。

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总结

随着生物医学的发展，脂质纳米粒作为mRNA的传递系统，展现了其在基因治疗和疫苗研发中的重要潜力。通过合理设计和优化LNP的组成，可以提高其在临床应用中的效果与安全性。为此，选择合适的转染试剂盒和优化实验条件是至关重要的。有关更多产品和服务的信息，欢迎访问我们的官方网站或通过ag尊龙凯时进行咨询。